배경
바이오의약품으로 사용되는 치료용 항체는 매우 복잡한 분자로, 제조과정 중에 엄격한 모니터링과 통제가 필요합니다.생물학적 약물로서의 특성으로 인해, 약물 안전성과 생산 방법의 내재적인 차이는 항상 우려의 원인이 됩니다.따라서 제품 품질을 분석하고 특성화하기 위해 포괄적이고 철저한 분석 특성화를 위한 일련의 작업 흐름이 적용되어야 합니다.
mAb, Fc-fusion 단백질, Fab, ADC, bsAbs, bispecific T cell engager (BiTE)와 같은 단클론 항체 제품의 승인이 연간으로 급증함에 따라, 개별적인 post-translational modifications (PTMs)을 이해하는 것은 제조하는 항체의 체내 유효성, 약동학 및 작용 메커니즘에 대한 통찰력과 예측을 개선시킬 수 있습니다.
항체의 특성분석은 일반적으로 다음과 같은 몇 가지 관점에서 수행됩니다. 먼저, top-down 분석 (전체 구조)으로 시작하여 bottom-up 분석 (펩타이드 서열 분석)을 거쳐 마지막으로 중간 middle-level 분석 (Fc, Fv, PTMs)까지 이어집니다.
ACROBiosystems는 항체와 PTMs의 특성 분석을 돕기 위한 일련의 효소를 개발했습니다.
제품 리스트
제품 상세 정보 | 카탈로그 넘버 | 단위 정의 |
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Endo H (500U/μl) | ENH-S5116 | One unit is defined as the amount of enzyme required to remove >95% of the carbohydrate from 10µg of denatured RNase B in 1 hour at 37°C in a total reaction volume of 10µl. |
Endo S (200U/μl) | ENS-S5143 | One unit deglycosylates ≥ 95% of 1 μg human IgG, when incubated in 10 mM sodium phosphate, 150 mM NaCl, pH7.4 at 37°C for 30 min. |
SpeB (40U/μl) | SPB-S5115 | One unit digests ≥ 95% of 1 µg human IgG1 when incubated in PBS ith 5 mM DTT or TCEP, pH 7.4 at 37°C for 1 hour. |
IdeS (20U/μl) | IDS-S5143 | One unit digests ≥ 95% of 1 μg human IgG when incubated in 10 mM sodium phosphate, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, pH7.4 at 7°C for 30min. |
Glycan 분석 도구
N-결합 glycan의 구조와 종류는 mAbs 및 Fc-fusion 단백질과 같은 치료용 단백질의 면역원성, 약동학 및 약리작용에 영향을 줄 수 있습니다.Endo H와 Endo S와 같은 효소는 N-결합 glycan의 유형별 절단을 제공하여 후속 분석을 가능케 합니다.
응용 분야
Endo H는 Asparagine에 결합된(N-결합) 하이브리드 또는 high-mannose 올리고당을 절단하지만 복잡한 올리고당은 절단하지 않습니다.
high-mannose 또는 하이브리드 N-glycan의 절단 제품 특징
Complex glycan 을 절단하지 않는 선택성
SDS-PAGE 측정 순도 : ≥95%
최적 pH: 5-6
반응 시간: 1시간
응용 분야
Endo S는 복잡한 올리고당을 우선적으로 절단하며, Asparagine 에 결합된(N-결합) 하이브리드 또는 high-mannose 올리고당의 절단을 피합니다.
복잡한 글리칸을 절단하며, high-mannose 및 하이브리드 유형의 glycan에 대해서는 활동이 제한적입니다. 제품 특징
IgG-특이적 고효율 endoglycosidase
SDS-PAGE 측정 순도 : ≥95%
반응 시간: 30분
Antibody Subunit Fragmentation
응용 분야
SpeB 효소는 IgG를 소화하여 Fab 및 Fc 단편을 생성합니다.다양한 응용 분야에서 사용되는 정제된 homogenous Fab 단편은 다음과 같습니다:
항원에 대한 Fab 단편의 monovalent binding 연구 Fc-mediated effector 기능의 제거 Fc 상호작용으로 인한 비특이적 결합의 감소 제품 특징
절단 위치 (human IgG1): KTHT / CPPCPAP (hinge 위쪽)
반응 시간: 60분
응용 분야:
IdeS protease는 hinge 영역 아래의 IgG를 특이적으로 F(ab´)2 및 Fc 단편으로 절단합니다.
제품 특징
절단 위치 (human IgG1): CPAPELLG / GPSVF (hinge 위쪽)
반응 시간: 30분