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PD-1 경로 재조합 단백 컬렉션

PD1 Pathway
소개

면역 체크포인트 경로는 오늘날 암 연구의 초점이고 PD-1은 가장 잘 특성화된 체크포인트 단백 중 하나입니다. PD-1과 리간드 PD-L1 및/또는 PD-L2 사이의 결합은 T 세포 활성화를 억제하고 암세포가 신체의 면역 감시에서 벗어날 수 있도록 합니다. 이 메커니즘은 PD-L1 경로를 중화하면  면역 체계를 다시 활성화하는 데 도움이 될 수 있다는 아이디어를 촉발하였고 이는 암과의 전투에 도움줄 수 있습니다.

최근 몇 년 동안 여러 종류의 항 PD-1 약물이 개발되었으며 최근 임상 시험에서 엄청난 잠재력이 입증되었습니다. 흑색종, 신세포암, 비소세포폐암(NSCLC) 또는 혈액암 환자는 모두 이 치료에 긍정적인 반응을 보였습니다.

ACROBiosystems는 연구자들이 PD-1 경로를 조사하고 표적화할 수 있도록 포괄적인 PD-1 관련 제품 시리즈를 제공합니다.

주요 특징

비오틴화된 PD-1 경로 단백

ELISA

ELISA는 단백질-단백질간 상호작용을 특성화하기 위해 일상적으로 사용되는 분석 기술이고 화합물 라이브러리의 초기 HTS(고처리량 스크리닝)에 자주 사용됩니다. ACROBiosystems는 다양한 사전 비오틴화 PD-1 경로 단백을 개발하였고 비오틴화된 단백은 ELISA 분석에서 포획 및 검출의 양방향 항체 역할을 할 수 있습니다.그들은 전통적인 항체보다 더 높은 특이성과 검출 감도를 보여주었습니다.

PD1-H82F3-E1.jpg

그림 1. 2 μg/mL (100 μL/well)의 고정된 인간 PD-1(제품 번호 PD1-H5257)은 비오틴화된 인간 PD-L1, His & Fc 태그(제품 번호 PD1-H82F3)와  선형 범위0.01-0.25 μg/ml로결합할 수 있습니다.


       권장 페어링

제품 설명제품 번호구조
Pair 1Human PD-L1 / B7-H1 Protein, Fc Tag, low endotoxinPD1-H5258
PD1-H5258-STC1
Pair 2Mouse PD-L1 / B7-H1 Protein, Fc TagPD1-M5251
PD1-M5251-STC1
Biotinylated Mouse PD-1 / PDCD1, Fc Tag, Avi Tag (AviTagTM)PD1-M82F4
PD1-M82F4-STC1
Pair 3Human PD-1 / PDCD1 Protein, Fc Tag (HPLC-verified), low endotoxinPD1-H5257
PD1-H5257
Biotinylated Human PD-L1 / B7-H1, His Tag & Fc Tag, Avi Tag (AviTagTM)PD1-H82F3
PD1-H82F3-STC1
Pair 4Mouse PD-1 / PDCD1 Protein, Fc TagPD1-M5259
PD1-M5259
Biotinylated Mouse PD-L1 / B7-H1, Fc Tag, Avi Tag (AviTagTM)PD1-M82F5
PD1-M82F5-STC1

연구를 더욱 단순화하기 위해 PD-1[비오틴]: PD-L1 억제제 스크리닝 키트(제품 번호 EP-101)를 개발했습니다.이 분석은 고정된 인간 PD-L1과 자체 개발한 비오틴화된 PD-1 단백 간의 결합을 측정하는 간단한 비색 ELISA 플랫폼을 사용하였습니다.이 제품은 추정 PD-1 및 PD-L1 억제제의 신속하고 높은 처리량 스크리닝에 적합합니다.

분자제품 번호제품 설명사이즈
PD-1 & PD-L1EP-101PD-1[Biotin]: PD-L1 Inhibitor Screening Pair
96 tests, 480 tests
PD-L1

그림 2 2μg/mL(100μL/well)의 고정된 PD-L1은  0.038 - 0.6μg/mL의 선형 범위로 비오틴화된 인간 PD-1에 결합할 수 있다는 것을 Streptavidin-HRP에 의해 검출 되였습니다.

PD-1-PD-L1.jpg

그림 3 항-PD-1 중화 항체에 의한 PD-1-PD-L1 결합의 억제는 PD-1[비오틴화]: PD-L1 억제제 스크리닝 ELISA 분석 쌍(제품 번호 EP-101)에 의해 측정됩니다.          

FAC 정렬

비오틴화된 단백질은 형광단 표지된 SA와 함께 사용하여 특정 표면 마커를 발현하는 세포를 검출/분리할 수 있습니다. "ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF"(미국 특허 20160159905)라는 제목의 미국 특허에서 저자(Pfizer Inc.)는 ACROBiosystems의 바이오틴화된 PD-L1(제품 번호 PD1-H82F3)와  바이오틴화된PD-L2(제품 번호 PD2-H82F6)을 사용하여  PD-1 발현 세포에 대한 결합 분석에서 후보 항체와 경쟁하였습니다. 이 분석은 해당 항체의 결합 활성에 대한 측정을 제공하였습니다.

바이오패닝

Biopanning은 점점 항체 개발을 위한 주류 접근 방식이 되었습니다. AviTagTM 비오틴화된 단백은 바이오패닝에서 SA 코팅된 자기 비드/표면과 함께 사용할 수 있습니다. 더 높은 코팅 밀도와 균일한 항원 제시를 제공하기 때문에 비오틴화되거나 화학적으로 비오틴화된 단백보다 훨씬 더 나은 선택입니다.

Fc 태그는 위양성 결과를 생성하기 때문에 일반적으로 이러한 실험에 쓰지 않습니다.우리는 His 태그만 부착된 AviTagTM PD-1 경로 단백질을 개발했고 이러한 제품은 특히 바이오패닝에 쓰는 것을 권장합니다.

분자제품 번호구조순도특징
PD-1PD1-H82E4
PD1-H82E4-STC1

PD-L1PD1-H82E5
PD1-H82E5-STC1

PD-L2PD2-H82E8
PD2-H82E8-STC1

세포 기반 분석 검증된 단백질

제약회사의 전문 공급업체로서 표적 단백의 활성을 검증하기 위해 세포 기반 분석 플랫폼을 구축하여 약물 스크리닝에 세포 기반 실험 데이터를 지원합니다.

ACROBiosystems는 유세포 분석 및 세포 기반 ELISA에서 자체 제작한 인간 PD-1 과발현 293 세포를 사용했으며, PD-L1(제품 번호 PD1-H5258)과 PD-L2(제품 번호 PD2-H5251) 는 PD-1에 결합할수 있습니다.

세포 표면 PD-1에 결합하는 PD-L1 또는 PD-L2의 FACS 분석
PD1-H5258

그림 4 유세포 분석에 따르면 재조합 인간 PD-L1 (제품 번호 PD1-H5258)는 인간 PD-1을 과발현하는 293 세포에 결합할 수 있습니다. 사용된 PD-L1의 농도는 10ug/mL입니다.

PD2-H5251

그림 5 유세포 분석에 따르면 재조합 인간 PD-L2(제품 번호 PD2-H5251)는 인간 PD-1을 과발현하는 293 세포에 결합할 수 있습니다. 사용된 PD-L2의 농도는 1ug/mL입니다.

중화항체 스크리닝 적용 가능을 검증
PD1-H82F3-E1.jpg

도 6 FACS 분석에 따르면 PD-L1(제품 번호 PD1-H5258)는  PD-1의 과발현한 293에 대한 결합은 중화 항-hPD-L1 항체의 농도를 증가시킴으로써 억제되였습니다. 사용된 PD-L1의 농도는 10μg/mL입니다. IC50은 12.92μg/mL입니다.

세포 기반 ELISA
PD1-H5258

그림 7 고정화된 세포 표면 PD-1(웰당 5x104개의 세포)는 0.029μg/mL의 EC50으로 인간 PD-L1, Fc 태그(제품 번호 PD1-H5258)에 결합할 수 있습니다.

PD2-H5251

그림 8 고정화된 세포 표면 PD-1(웰당 5x104개의 세포)는 0.018μg/mL의 EC50으로 인간 PD-L2, Fc 태그(제품 번호 PD2-H5251)에 결합할 수 있습니다.

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